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糖基化分析的重要性

编辑:南京科瑞芯生物科技有限公司时间:2021-09-06

糖基化分析的重要性

糖链常用的分析方法有:液相色谱法、毛细管电泳法和高效阴离子交换色谱法。但无论是液相色谱法还是毛细管电泳法,都必须使用专用试剂进行荧光衍生。此衍生耗时长(4小时)且会导致唾液酸丢失,不能准确分析含唾液酸样品。且也无法分析磷酸化糖及硫酸化糖。而离子色谱无需衍生,定量准确,可以覆盖分析所有糖类型。

 

离子色谱-糖基化分析方法

 

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法,是目前领先的糖分析方法,具有无需衍生、分离度好、灵敏度高、同时适用所有糖修饰形态等诸多优势。

N—糖基化修饰的糖链可以通过肽糖苷酶F或肽糖苷酶A酶切作用,或者肼解作用从糖蛋白上释放出来。糖链经净化后可直接进样,无需衍生,避免了衍生化过程中唾液酸化聚糖的结构改变。

离子色谱还可以和高分辨质谱联用,实现对色谱峰的鉴别。以Q Exactive为代表的Orbitrap超高分辨率质谱对未标记的糖具有高灵敏度,可解析糖链结构。安培检测器、高分辨质谱和离子色谱联用,可同时解决糖链的定性和定量分析。

单抗糖链主要由葡萄糖胺、半乳糖胺、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、唾液酸等单糖组成。单糖组成测定可以从基础水平上对单抗的糖组成差异给出解析。

 

对于中性糖和氨基糖的分析,通常使用酸水解的方式,使蛋白中的单糖释放。样品水解后,直接进样,无需衍生。

单抗糖链主要由葡萄糖胺、半乳糖胺、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、唾液酸等单糖组成。单糖组成测定可以从基础水平上对单抗的糖组成差异给出解析。

 

对于中性糖和氨基糖的分析,通常使用酸水解的方式,使蛋白中的单糖释放。样品水解后,直接进样,无需衍生。


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